Hatur nuhun pikeun ngadatangan Nature.com. Versi browser anu anjeun anggo gaduh dukungan CSS kawates. Pikeun hasil nu pangsaena, kami nyarankeun make browser nu leuwih anyar (atawa nganonaktipkeun mode kasaluyuan dina Internet Explorer). Samentawis éta, pikeun mastikeun dukungan anu terus-terusan, kami bakal nampilkeun situs tanpa gaya sareng JavaScript.
Ngadegkeun modél sato modic change (MC) mangrupa dasar penting pikeun diajar MC. Lima puluh opat kelenci Bodas Selandia Anyar dibagi kana grup operasi syam, grup implantasi otot (grup ME) jeung grup implantasi nucleus pulposus (grup NPE). Dina grup NPE, disc intervertebral ieu kakeunaan ku pendekatan bedah lumbar anterolateral sarta jarum ieu dipaké pikeun puncture awak vertebral L5 deukeut plat tungtung. NP ieu sasari tina L1 / 2 intervertebral disc ku jarum suntik sarta nyuntik kana eta. Pangeboran liang dina tulang subchondral. Prosedur bedah sareng metode pangeboran dina grup implantasi otot sareng grup operasi syam sami sareng anu aya dina grup implantasi NP. Dina grup ME, sapotong otot ieu disimpen kana liang, sedengkeun dina grup syam-operasi, nanaon disimpen kana liang. Saatos operasi, scanning MRI sareng uji biologis molekular dilaksanakeun. Sinyal dina grup NPE robah, tapi euweuh parobahan sinyal atra dina grup syam-operasi jeung grup ME. Observasi histologis nunjukkeun yén proliferasi jaringan abnormal dititénan dina situs implantasi, sareng ekspresi IL-4, IL-17 sareng IFN-γ ningkat dina grup NPE. Implantasi NP kana tulang subchondral tiasa ngabentuk modél sato MC.
Parobahan modic (MC) mangrupakeun lesions tina endplates vertebral jeung sumsum tulang padeukeut katempo dina magnét résonansi Imaging (MRI). Éta cukup umum di individu anu ngagaduhan gejala anu aya hubunganana1. Loba studi geus emphasized pentingna MC alatan pakaitna jeung nyeri deui low (LBP) 2,3. de Roos et al.4 na Modic et al.5 mandiri munggaran digambarkeun tilu tipena béda Abnormalitas sinyal subchondral dina sungsum tulang vertebral. Modic tipe I parobahan anu hypointense on T1-weighted (T1W) runtuyan jeung hyperintense on T2-weighted (T2W) runtuyan. Lesi ieu nembongkeun endplates fissure jeung jaringan granulasi vaskular padeukeut dina sumsum tulang. Parobahan tipe II modic nembongkeun sinyal luhur duanana runtuyan T1W jeung T2W. Dina tipe ieu lesion, karuksakan endplate bisa kapanggih, kitu ogé ngagantian lemak histological tina sungsum tulang padeukeut. Modic tipe III parobahan némbongkeun sinyal low dina runtuyan T1W na T2W. Lesions sclerotic pakait jeung endplates geus katalungtik6. MC dianggap kasakit patologis tulang tonggong jeung pakait raket jeung loba kasakit degenerative tulang tonggong7,8,9.
Mertimbangkeun data anu sayogi, sababaraha panilitian parantos masihan wawasan anu lengkep ngeunaan étiologi sareng mékanisme patologis MC. Albert et al. ngusulkeun yén MC bisa disababkeun ku herniation disc8. Hu et al. attributed MC ka degeneration disc parna10. Kroc ngajukeun konsép "beubeulahan cakram internal," anu nyatakeun yén trauma disc repetitive tiasa ngakibatkeun microtears dina endplate. Saatos formasi cleft, karuksakan endplate ku nucleus pulposus (NP) bisa memicu respon otoimun, nu salajengna ngabalukarkeun ngembangkeun MC11. Ma et al. ngabagi pandangan anu sami sareng ngalaporkeun yén autoimmunity anu diinduksi NP maénkeun peran konci dina patogenesis MC12.
Sél sistem imun, utamana CD4 + T helper limfosit, maénkeun peran kritis dina pathogenesis of autoimmunity13. Subset Th17 anu nembe kapendak ngahasilkeun sitokin proinflamasi IL-17, ngamajukeun ekspresi chemokine, sareng ngarangsang sél T dina organ anu ruksak pikeun ngahasilkeun IFN-γ14. Sél Th2 ogé maénkeun peran unik dina pathogenesis réspon imun. Ekspresi IL-4 salaku wawakil sél Th2 tiasa ngakibatkeun konsékuansi imunopatologis parah15.
Sanaos seueur panilitian klinis anu dilakukeun dina MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, masih aya kakurangan model ékspérimén sato anu cocog anu tiasa niru prosés MC anu sering lumangsung dina manusa sareng tiasa dipaké pikeun nalungtik etiology atawa perlakuan anyar kayaning terapi sasaran. Nepi ka ayeuna, ngan ukur sababaraha model sato MC anu dilaporkeun pikeun ngulik mékanisme patologis anu aya.
Dumasar kana téori otoimun anu diajukeun ku Albert sareng Ma, panilitian ieu ngadegkeun modél MC kelenci anu sederhana sareng tiasa diulang ku cara autotransplanting NP caket piring tungtung vertebral anu dibor. Tujuan sejenna nyaeta pikeun niténan ciri histologis model sato jeung evaluate mékanisme husus NP dina ngembangkeun MC. Pikeun tujuan ieu, kami nganggo téknik sapertos biologi molekular, MRI, sareng studi histologis pikeun ngulik kamajuan MC.
Dua kelenci maot perdarahan salila bedah, sarta opat kelenci maot salila anesthesia salila MRI. Sésana 48 kelenci salamet tur teu némbongkeun tanda behavioral atawa neurological sanggeus bedah.
MRI nunjukkeun yén inténsitas sinyal jaringan anu dipasang dina liang anu béda-béda béda. Inténsitas sinyal awak vertebral L5 dina grup NPE laun robah di 12, 16 na 20 minggu sanggeus panempatan (urutan T1W némbongkeun sinyal low, sarta runtuyan T2W némbongkeun sinyal dicampur tambah sinyal low) (Gbr. 1C), sedengkeun appearances MRI tina dua grup lianna bagian embedded tetep rélatif stabil salila période sarua (Gbr. 1A, B).
(A) Perwakilan sequential MRIs tina kelenci lumbar tulang tonggong dina 3 waktos titik. Henteu aya gangguan sinyal anu kapendak dina gambar grup operasi syam. (B) Karakteristik sinyal awak vertebral dina grup ME téh sarupa jeung pamadegan dina grup syam-operasi, sarta euweuh parobahan sinyal signifikan anu dititénan dina situs embedding kana waktu. (C) Dina grup NPE, sinyal low jelas katempo dina runtuyan T1W, sarta sinyal dicampur jeung sinyal low jelas katempo dina runtuyan T2W. Ti période 12-minggu nepi ka période 20-minggu, sinyal luhur sporadis sabudeureun sinyal low dina runtuyan T2W ngurangan.
hyperplasia tulang atra bisa ditempo dina situs implantation awak vertebral dina grup NPE, sarta hyperplasia tulang lumangsung gancang ti 12 mun 20 minggu (Gbr. 2C) dibandingkeun jeung grup NPE, euweuh parobahan signifikan dititénan dina vertebral dimodelkeun. awak; Grup Sham sareng grup ME (Gbr. 2C) 2A,B).
(A) Beungeut awak vertebral di bagian implanted pisan lemes, liang heals ogé, sarta euweuh hyperplasia dina awak vertebral. (B) Bentuk situs implanted dina grup ME téh sarupa jeung dina grup operasi syam, sarta euweuh parobahan atra dina penampilan situs implanted kana waktu. (C) Hyperplasia tulang lumangsung dina situs implanted dina grup NPE. The hyperplasia tulang ngaronjat gancang sarta malah ngalegaan ngaliwatan disc intervertebral kana awak vertebral contralateral.
Analisis histologis nyayogikeun inpormasi anu langkung rinci ngeunaan formasi tulang. Gambar 3 nunjukkeun poto-poto bagian pasca operasi anu diwarnaan ku H&E. Dina grup syam-operasi, nu chondrocytes anu disusun ogé tur euweuh proliferasi sél ieu kauninga (Gbr. 3A). Kaayaan di grup ME éta sarupa jeung di grup sham-operasi (Gbr. 3B). Sanajan kitu, dina grup NPE, sajumlah badag chondrocytes sarta proliferasi sél NP-kawas anu observasi dina situs implantation (Gbr. 3C);
(A) Trabeculae bisa ditempo deukeut piring tungtung, chondrocytes nu disusun rapih kalayan ukuran sél seragam jeung wangun jeung euweuh proliferasi (40 kali). (B) Kaayaan situs implantasi dina grup ME sarua jeung grup sham. Trabeculae na chondrocytes bisa ditempo, tapi euweuh proliferasi atra di situs implantation (40 kali). (B) Ieu bisa ditempo yén chondrocytes jeung sél NP-kawas proliferasi nyata, sarta bentuk jeung ukuran chondrocytes henteu rata (40 kali).
Ekspresi interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, sareng interferon γ (IFN-γ) mRNA dititénan dina duanana grup NPE sareng ME. Nalika tingkat éksprési gén target dibandingkeun, éksprési gén IL-4, IL-17, sareng IFN-γ sacara signifikan ningkat dina grup NPE dibandingkeun sareng grup ME sareng grup operasi syam (Gbr. 4) (P <0.05). Dibandingkeun sareng grup operasi syam, tingkat ekspresi IL-4, IL-17, sareng IFN-γ dina grup ME ningkat ngan sakedik sareng henteu ngahontal parobahan statistik (P> 0.05).
Ekspresi mRNA IL-4, IL-17 sareng IFN-γ dina grup NPE nunjukkeun tren anu langkung luhur tibatan anu aya dina grup operasi syam sareng grup ME (P <0.05).
Kontras, tingkat éksprési dina grup ME henteu nunjukkeun bédana anu signifikan (P> 0.05).
Analisis Western blot dipigawé maké antibodi sadia komersil ngalawan IL-4 jeung IL-17 pikeun ngonfirmasi pola ekspresi mRNA dirobah. Sapertos anu dipidangkeun dina Gambar 5A,B, dibandingkeun sareng grup ME sareng grup operasi syam, tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 dina grup NPE ningkat sacara signifikan (P <0.05). Dibandingkeun sareng grup operasi syam, tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 dina grup ME ogé gagal ngahontal parobahan anu signifikan sacara statistik (P> 0.05).
(A) Tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 dina grup NPE sacara signifikan langkung luhur tibatan dina grup ME sareng grup plasebo (P <0.05). (B) histogram Western blot.
Kusabab jumlah kawates sampel manusa anu dicandak nalika dioperasi, studi anu jelas sareng detil ngeunaan patogenesis MC rada sesah. Kami nyobian ngadamel modél sato MC pikeun diajar mékanisme patologis poténsial na. Dina waktu nu sarua, evaluasi radiological, evaluasi histological jeung evaluasi biologis molekular anu dipaké pikeun nuturkeun kursus MC ngainduksi ku NP autograft. Hasilna, modél implantasi NP nyababkeun parobahan bertahap dina inténsitas sinyal tina 12-minggu ka 20-minggu titik waktu (sinyal low dicampur dina urutan T1W jeung sinyal low dina urutan T2W), nunjukkeun parobahan jaringan, sarta histologis jeung molekular. evaluasi biologis dikonfirmasi hasil ulikan radiological.
Hasil percobaan ieu nunjukkeun yén parobahan visual sareng histologis lumangsung dina situs palanggaran awak vertebral dina grup NPE. Dina waktos anu sami, éksprési gén IL-4, IL-17 sareng IFN-γ, ogé IL-4, IL-17 sareng IFN-γ dititénan, nunjukkeun yén palanggaran jaringan pulposus inti autologous dina vertebral. awak bisa ngabalukarkeun runtuyan sinyal jeung parobahan morfologis. Ieu gampang pikeun manggihan yén ciri sinyal awak vertebral model sato (sinyal low dina runtuyan T1W, sinyal dicampur jeung sinyal low dina runtuyan T2W) pisan sarupa pamadegan sél vertebral manusa, sarta ciri MRI ogé. mastikeun observasi histology jeung anatomi kasar, nyaeta, parobahan dina sél awak vertebral anu kutang. Sanajan réspon radang disababkeun ku trauma akut bisa muncul pas sanggeus kabocoran, hasil MRI némbongkeun yén progressively ngaronjatna parobahan sinyal mucunghul 12 minggu sanggeus kabocoran sarta terus nepi ka 20 minggu tanpa aya tanda recovery atawa ngabalikeun tina parobahan MRI. Hasil ieu nunjukkeun yén NP vertebral autologous mangrupakeun padika dipercaya pikeun ngadegkeun MV kutang dina kelenci.
Modél tusukan ieu merlukeun kaahlian, waktu, jeung usaha bedah nyukupan. Dina percobaan awal, dissection atanapi stimulasi kaleuleuwihan tina struktur ligamentous paravertebral bisa ngakibatkeun formasi osteophytes vertebral. Kudu ati-ati supados henteu ngaruksak atanapi ngaganggu cakram anu caket. Kusabab jero penetrasi kudu dikawasa pikeun ménta hasil konsisten tur reproducible, urang sacara manual dijieun colokan ku motong kaluar palapah tina jarum panjang 3 mm. Ngagunakeun colokan ieu ensures jero pangeboran seragam dina awak vertebral. Dina percobaan awal, tilu ahli bedah ortopedi aub dina operasi kapanggih jarum 16-gauge gampang pikeun digawe sareng ti jarum 18-gauge atawa métode séjén. Pikeun ngahindarkeun perdarahan kaleuleuwihan nalika pangeboran, nahan jarum sakedap bakal nyayogikeun liang sisipan anu langkung cocog, nunjukkeun yén tingkat MC anu tangtu tiasa dikontrol ku cara ieu.
Sanaos seueur panilitian nargétkeun MC, sakedik dipikanyaho ngeunaan étiologi sareng patogenesis MC25,26,27. Dumasar kana panilitian urang saacanna, urang mendakan yén otoimunitas maénkeun peran konci dina lumangsungna sareng ngembangkeun MC12. Ulikan ieu nalungtik éksprési kuantitatif IL-4, IL-17, jeung IFN-γ, nu mangrupakeun jalur diferensiasi utama sél CD4 + sanggeus stimulasi antigen. Dina ulikan kami, dibandingkeun sareng grup négatip, grup NPE ngagaduhan ekspresi anu langkung luhur tina IL-4, IL-17, sareng IFN-γ, sareng tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 ogé langkung luhur.
Klinis, ekspresi mRNA IL-17 ngaronjat dina sél NP ti penderita herniation28 disc. Ngaronjat tingkat éksprési IL-4 sareng IFN-γ ogé kapanggih dina modél herniasi disc non-compressive akut dibandingkeun sareng controls29 séhat. IL-17 maénkeun peran konci dina peradangan, tatu jaringan dina kasakit otoimun30 sarta ngaronjatkeun réspon imun ka IFN-γ31. Enhanced tatu jaringan IL-17-dimédiasi geus dilaporkeun dina MRL / lpr mice32 na autoimmunity-susceptible mice33. IL-4 tiasa ngahambat ekspresi cytokines proinflammatory (sapertos IL-1β sareng TNFα) sareng aktivasina makrofag34. Dilaporkeun yén ekspresi mRNA IL-4 béda dina grup NPE dibandingkeun IL-17 sareng IFN-γ dina waktos anu sami; Ekspresi mRNA IFN-γ dina grup NPE sacara signifikan langkung luhur tibatan grup anu sanés. Ku alatan éta, produksi IFN-γ bisa jadi mediator tina respon radang ngainduksi ku intercalation NP. Panaliti nunjukkeun yén IFN-γ diproduksi ku sababaraha jinis sél, kalebet sél T helper tipe 1 diaktipkeun, sél pembunuh alami, sareng makrofag35,36, sareng mangrupikeun sitokin pro-radang konci anu ngamajukeun réspon imun37.
Panaliti ieu nunjukkeun yén réspon otoimun tiasa kalibet dina lumangsungna sareng ngembangkeun MC. Luoma et al. kapanggih yén ciri sinyal MC jeung nonjol NP nu sarupa dina MRI, sarta duanana nembongkeun sinyal tinggi dina T2W sequence38. Sababaraha sitokin geus dikonfirmasi raket patalina jeung lumangsungna MC, kayaning IL-139. Ma et al. ngusulkeun yén tonjolan luhur atawa ka handap NP bisa boga pangaruh hébat kana lumangsungna sarta ngembangkeun MC12. Bobechko40 na Herzbein et al.41 dilaporkeun yén NP mangrupa jaringan immunotolerant nu teu bisa asup kana sirkulasi vaskular ti kalahiran. Protrusions NP ngawanohkeun awak asing kana suplai getih, kukituna mediating réaksi otoimun lokal42. Réaksi otoimun tiasa nyababkeun sajumlah ageung faktor imun, sareng nalika faktor ieu terus-terusan kakeunaan jaringan, aranjeunna tiasa nyababkeun parobihan dina signalling43. Dina ulikan ieu, overexpression of IL-4, IL-17 jeung IFN-γ mangrupakeun faktor imun has, salajengna ngabuktikeun hubungan deukeut antara NP na MCs44. Modél sato ieu ogé meniru terobosan NP sareng asup kana piring tungtung. Proses ieu salajengna ngungkabkeun dampak otoimunitas dina MC.
Sapertos anu dipiharep, modél sato ieu nyayogikeun kami platform anu mungkin pikeun diajar MC. Sanajan kitu, modél ieu masih mibanda sababaraha watesan: mimitina, salila fase observasi sato, sababaraha kelenci tahap panengah perlu euthanized pikeun nguji biologi histologis jeung molekular, jadi sababaraha sato "leungit tina pamakéan" kana waktu. Bréh, sanajan tilu titik waktu diatur dina ulikan ieu, hanjakalna, urang ngan dimodelkeun hiji tipe MC (Modic tipe I robah), jadi teu cukup keur ngagambarkeun prosés ngembangkeun kasakit manusa, sarta leuwih titik waktu perlu disetel ka hadé niténan sagala parobahan sinyal. Katilu, parobihan dina struktur jaringan tiasa ditingalikeun sacara jelas ku pewarnaan histologis, tapi sababaraha téknik khusus tiasa langkung saé ngungkabkeun parobahan mikrostruktur dina modél ieu. Contona, mikroskop cahaya polarized ieu dipaké pikeun nganalisis formasi fibrocartilage dina cakram intervertebral kelenci45. Balukar jangka panjang NP on MC na endplate merlukeun ulikan satuluyna.
Lima puluh opat kelenci bodas Selandia Anyar jalu (beurat kira-kira 2.5-3 kg, umur 3-3.5 bulan) dibagi sacara acak kana grup operasi syam, grup implantasi otot (grup ME) jeung grup implantasi akar saraf (grup NPE). Sadaya prosedur ékspérimén disatujuan ku Komite Etika Rumah Sakit Tianjin, sareng metode ékspérimén dilaksanakeun saluyu sareng pedoman anu disatujuan.
Sababaraha perbaikan parantos dilakukeun kana téknik bedah S. Sobajima 46 . Unggal kelenci ieu disimpen dina posisi recumbency gurat jeung beungeut anterior lima padeukeut cakram intervertebral lumbar (IVDs) ieu kakeunaan ngagunakeun pendekatan retroperitoneal posterolateral. Unggal kelenci dibéré anesthesia umum (20% urethane, 5 ml / kg ngaliwatan urat ceuli). A incision kulit longitudinal dijieun ti ujung handap tulang rusuk ka brim pelvic, 2 cm véntral kana otot paravertebral. Tulang tonggong anterolateral katuhu ti L1 mun L6 ieu kakeunaan ku dissection seukeut tur Blunt tina jaringan subcutaneous overlying, jaringan retroperitoneal, sarta otot (Gbr. 6A). Tingkat cakram ditetepkeun nganggo panggul pelvic salaku landmark anatomis pikeun tingkat cakram L5-L6. Paké jarum puncture 16-gauge pikeun bor liang deukeut plat tungtung tina Vertebra L5 ka jero 3 mm (Gbr. 6B). Paké jarum suntik 5-ml pikeun aspirate nu autologous nucleus pulposus dina disc intervertebral L1-L2 (Gbr. 6C). Leupaskeun inti pulposus atawa otot nurutkeun sarat unggal grup. Saatos liang bor ieu deepened, sutures absorbable disimpen dina fascia jero, fascia deet jeung kulit, jaga ulah ngaruksak jaringan periosteal awak vertebral salila bedah.
(A) Cakram L5-L6 kakeunaan ku pendekatan retroperitoneal posterolateral. (B) Paké jarum 16-gauge pikeun bor liang deukeut endplate L5. (C) MFs Autologous dipanén.
Anesthesia umum dikaluarkeun kalawan 20% urethane (5 ml / kg) dikaluarkeun via urat ceuli, sarta radiographs tulang tonggong lumbar anu terus-terusan dina 12, 16, sarta 20 minggu postoperatively.
Kelenci dikurbankeun ku suntikan intramuskular ketamine (25.0 mg / kg) sareng natrium pentobarbital intravena (1.2 g / kg) dina 12, 16 sareng 20 minggu saatos operasi. Sakabéh tulang tonggong dipiceun pikeun analisa histologis sareng analisa nyata dilakukeun. Transkripsi sabalikna kuantitatif (RT-qPCR) sareng Western blotting digunakeun pikeun ngadeteksi parobahan faktor imun.
Pamariksaan MRI dilaksanakeun dina kelenci ngagunakeun magnet klinis 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) dilengkepan panarima coil dahan ortogonal. Kelenci dibius ku 20% urethane (5 mL/kg) ngaliwatan urat ceuli teras ditempatkeun supine dina magnet kalayan daérah lumbar dipuseurkeun kana coil permukaan sirkular diaméterna 5 inci (GE Medical Systems). Coronal T2-weighted localizer gambar (TR, 1445 mdet; TE, 37 mdet) anu kaala keur ngartikeun lokasi lumbar disc ti L3-L4 mun L5-L6. Sagittal pesawat T2-weighted keureut ieu kaala jeung setélan handap: gancang spin-gema runtuyan ku waktu pengulangan (TR) tina 2200 mdet sarta hiji waktu gema (TE) tina 70 mdet, matrix; widang visual 260 jeung dalapan rangsangan; Ketebalan motong éta 2 mm, celah éta 0,2 mm.
Saatos poto terakhir dicandak sareng kelenci anu terakhir tiwas, cakram sham, otot-embedded, sareng NP dipiceun kanggo pamariksaan histologis. Tisu dibereskeun dina 10% formalin buffered nétral salila 1 minggu, decalcified kalawan asam ethylenediaminetetraacetic, sarta parafin sectioned. Blok jaringan dipasang dina parafin sareng dipotong kana bagian sagittal (kandel 5 μm) nganggo microtome. Bagian diwarnai dengan hematoxylin dan eosin (H&E).
Saatos ngumpulkeun cakram intervertebral tina kelenci dina unggal grup, total RNA diekstrak nganggo kolom UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) numutkeun petunjuk produsén sareng sistem transkripsi balik ImProm II (Promega Inc. , Madison, WI, AS). Transkripsi sabalikna dilaksanakeun.
RT-qPCR dipigawé maké prisma 7300 (Applied Biosystems Inc., AS) sarta SYBR Héjo Luncat Mimitian Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, AS) nurutkeun parentah produsén urang. Volume réaksi PCR nyaéta 20 μl sareng ngandung 1,5 μl cDNA éncér sareng 0,2 μM unggal primer. Primers dirancang ku OligoPerfect Desainer (Invitrogen, Valencia, CA) jeung dijieun ku Nanjing Golden Stewart Biotéhnologi Co., Ltd. (Cina) (Table 1). Kaayaan siklus termal di handap ieu dipaké: léngkah aktivasina polimérase awal dina 94 ° C pikeun 2 mnt, teras 40 siklus 15 detik masing-masing dina 94 ° C pikeun denaturasi template, annealing pikeun 1 mnt dina 60 ° C, ekstensi, sareng fluoresensi. pangukuran dilaksanakeun pikeun 1 mnt dina 72 ° C. Sadaya sampel diamplifikasi tilu kali sareng nilai rata-rata dianggo pikeun analisis RT-qPCR. Data amplifikasi dianalisis nganggo FlexStation 3 (Alat Molekul, Sunnyvale, CA, AS). Ekspresi gén IL-4, IL-17, sareng IFN-γ dinormalisasi kana kontrol endogen (ACTB). Tingkat éksprési relatif mRNA udagan diitung ngagunakeun métode 2-ΔΔCT.
Total protéin diekstrak tina jaringan maké homogenizer jaringan dina panyangga lisis RIPA (ngandung protease jeung phosphatase inhibitor cocktail) lajeng centrifuged dina 13.000 rpm salila 20 mnt dina 4 ° C ngaleupaskeun lebu jaringan. Lima puluh mikrogram protéin dimuat per jalur, dipisahkeun ku 10% SDS-PAGE, teras dialihkeun kana mémbran PVDF. Blocking dipigawé dina 5% susu garing nonfat dina Tris-buffered saline (TBS) ngandung 0,1% Tween 20 pikeun 1 h dina suhu kamar. Mémbran ieu inkubasi jeung kelenci anti-decorin antibodi primér (diluted 1:200; Boster, Wuhan, Cina) (diluted 1:200; Bioss, Beijing, Cina) sapeuting dina 4 ° C sarta diréaksikeun dina poé kadua; kalawan antibodi sékundér (embe anti kelenci immunoglobulin G dina 1:40.000 éncér) digabungkeun jeung horseradish péroxidase (Boster, Wuhan, Cina) salila 1 jam dina suhu kamar. Sinyal Western blot dideteksi ku ngaronjat chemiluminescence dina mémbran chemiluminescent sanggeus irradiation sinar-X. Pikeun analisis densitometric, blots discan sareng diukur nganggo parangkat lunak BandScan sareng hasilna dinyatakeun salaku babandingan immunoreactivity gen target sareng immunoreactivity tubulin.
Itungan statistik dilaksanakeun nganggo pakét parangkat lunak SPSS16.0 (SPSS, AS). Data anu dikumpulkeun nalika diajar dinyatakeun salaku rata-rata ± simpangan baku (rata-rata ± SD) sareng dianalisis nganggo analisis varians (ANOVA) pikeun nangtukeun bédana antara dua kelompok. P <0.05 dianggap signifikan sacara statistik.
Ku kituna, ngadegna model sasatoan MC ku implanting NPs autologous kana awak vertebral sarta ngalakonan observasi macroanatomical, analisis MRI, evaluasi histologis jeung analisis biologi molekular bisa jadi hiji alat penting pikeun assessing tur pamahaman mékanisme MC manusa sarta ngamekarkeun terapi anyar. campur tangan.
Kumaha carana nyebatkeun artikel ieu: Han, C. et al. Modél sato tina parobahan Modic didirikan ku implanting autologous nucleus pulposus kana tulang subchondral tina tulang tonggong lumbar. Sci. Rep 6, 35102: 10.1038 / srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., sarta Boos, N. Imaging résonansi magnét tina tulang tonggong lumbar: Prévalénsi herniation disc sarta ingetan, komprési akar saraf, Abnormalitas plat tungtung, sarta osteoarthritis gabungan facet di sukarelawan asimtomatik. . laju. Radiology 209, 661-666, doi: 10.1148 / radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, sarta Leboeuf-Eed, K. parobahan Modic sarta hubungan maranéhanana papanggihan klinis. Éropa tulang tonggong Journal: publikasi resmi Éropa tulang tonggong Society, Éropa Society of deformity tulang tonggong, jeung Éropa Society pikeun cervical tulang tonggong Panalungtikan 15, 1312-1319, doi: 10.1007 / s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., dkk. Parobahan modic dina endplates lumbar vertebral: Prévalénsi sarta pakaitna jeung nyeri deui lemah sareng sciatica di pagawe jalu tengah-yuswa. Tulang tonggong 32, 1116-1122, Doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., sarta Dalinka, M. MRI tina parobahan sungsum tulang deukeut plat tungtung dina kasakit degenerative tina tulang tonggong lumbar. AJR. Amérika Journal of Radiology 149, 531-534, Doi: 10.2214 / ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, sarta Carter, JR kasakit disc Degenerative: evaluasi parobahan sungsum vertebral kalawan MRI. Radiologi 166, 193–199, doi:10.1148/radiologi.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, sarta Carter, JR Imaging kasakit disc degenerative. Radiologi 168, 177–186, Doi: 10.1148/radiologi.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktor tina endplate neovertebral (Modic) parobahan sinyal dina populasi umum. Éropa tulang tonggong Journal: Publikasi resmi ti Éropa tulang tonggong Society, nu Éropa Society of deformity tulang tonggong, jeung Society Éropa pikeun cervical tulang tonggong Panalungtikan, Divisi 19, 129-135, Doi: 10.1007 / s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB na Mannisch, K. parobahan Modic sanggeus herniation lumbar disc. Éropa tulang tonggong Journal: Publikasi resmi ti Éropa tulang tonggong Society, nu Éropa Society of deformity tulang tonggong jeung Society Éropa pikeun cervical tulang tonggong Panalungtikan 16, 977-982, Doi: 10.1007 / s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., sarta Kaapa, E. Modic tipe I parobahan bisa ngaduga degeneration disc deformational kutang gancang: ulikan prospektif 1-taun. Éropa tulang tonggong Journal 21, 1135-1142, Doi: 10.1007 / s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ jeung Fan, SW parobahan Modic: mungkin sabab jeung kontribusina pikeun degeneration lumbar disc. Hipotesis médis 73, 930-932, Doi: 10.1016 / j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV beubeulahan disc internal. Masalah disc prolapse leuwih 50 taun. Tulang tonggong (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
waktos pos: Dec-13-2024