Hatur nuhun parantos nganjang ka Nature.com. Versi browser anu anjeun anggo gaduh dukungan CSS anu terbatas. Pikeun hasil anu pangsaéna, kami nyarankeun nganggo browser anu langkung énggal (atanapi mareuman modeu kompatibilitas dina Internet Explorer). Samentawis waktos, pikeun mastikeun dukungan anu terus-terusan, kami bakal nampilkeun situs tanpa gaya sareng JavaScript.
Ngadegkeun modél sato tina parobahan modik (MC) mangrupikeun dasar anu penting pikeun nalungtik MC. Lima puluh opat kelenci Bodas Selandia Baru dibagi kana grup operasi palsu, grup implantasi otot (grup ME) sareng grup implantasi nukleus pulposus (grup NPE). Dina grup NPE, cakram intervertebral diungkabkeun ku pendekatan bedah lumbar anterolateral sareng jarum dianggo pikeun nusuk awak vertebral L5 caket pelat tungtung. NP diekstrak tina cakram intervertebral L1/2 ku jarum suntik sareng disuntikkeun kana éta. Ngabor liang dina tulang subkondral. Prosedur bedah sareng metode pangeboran dina grup implantasi otot sareng grup operasi palsu sami sareng anu aya dina grup implantasi NP. Dina grup ME, sapotong otot disimpen kana liang, sedengkeun dina grup operasi palsu, teu aya anu disimpen kana liang. Saatos operasi, scan MRI sareng uji biologis molekuler dilakukeun. Sinyal dina grup NPE robih, tapi teu aya parobahan sinyal anu jelas dina grup operasi palsu sareng grup ME. Observasi histologis nunjukkeun yén proliferasi jaringan abnormal katingali di tempat implantasi, sareng éksprési IL-4, IL-17 sareng IFN-γ ningkat dina grup NPE. Implantasi NP kana tulang subkondral tiasa ngabentuk modél sato MC.
Parobahan modik (MC) nyaéta lési dina pelat tungtung vertebral sareng sumsum tulang anu caket anu katingali dina pencitraan résonansi magnét (MRI). Éta umum pisan dina jalma anu ngagaduhan gejala anu aya hubunganana1. Seueur panilitian anu nekenkeun pentingna MC kusabab hubunganana sareng nyeri tonggong handap (LBP)2,3. de Roos et al.4 sareng Modic et al.5 sacara mandiri mimiti ngajelaskeun tilu jinis abnormalitas sinyal subkondral dina sumsum tulang vertebral. Parobahan tipe I modik nyaéta hipointens dina runtuyan T1-weighted (T1W) sareng hiperintens dina runtuyan T2-weighted (T2W). Lési ieu ngungkabkeun pelat tungtung fisura sareng jaringan granulasi vaskular anu caket dina sumsum tulang. Parobahan tipe II modik nunjukkeun sinyal anu luhur dina runtuyan T1W sareng T2W. Dina jinis lési ieu, karusakan pelat tungtung tiasa dipendakan, ogé panggantian lemak histologis tina sumsum tulang anu caket. Parobahan tipe III modik nunjukkeun sinyal anu handap dina runtuyan T1W sareng T2W. Lési sklerotik anu saluyu sareng pelat tungtung parantos dititénan6. MC dianggap panyakit patologis tulang tonggong sareng raket patalina sareng seueur panyakit degeneratif tulang tonggong7,8,9.
Ngabandingkeun data anu sayogi, sababaraha panilitian parantos masihan wawasan anu lengkep ngeunaan étiologi sareng mékanisme patologis MC. Albert et al. ngusulkeun yén MC tiasa disababkeun ku herniasi cakram8. Hu et al. ngaitkeun MC sareng degenerasi cakram anu parah10. Kroc ngusulkeun konsép "pecah cakram internal," anu nyatakeun yén trauma cakram anu diulang-ulang tiasa nyababkeun mikrocimata dina pelat tungtung. Saatos formasi celah, karusakan pelat tungtung ku nukleus pulposus (NP) tiasa micu réspon otoimun, anu salajengna ngarah kana kamekaran MC11. Ma et al. ngabagi pandangan anu sami sareng ngalaporkeun yén autoimunitas anu diinduksi NP maénkeun peran konci dina patogenesis MC12.
Sél sistem imun, khususna limfosit T helper CD4+, maénkeun peran penting dina patogenesis autoimunitas13. Subkumpulan Th17 anu nembe kapanggih ngahasilkeun sitokin proinflamasi IL-17, ningkatkeun éksprési kemokin, sareng ngarangsang sél T dina organ anu ruksak pikeun ngahasilkeun IFN-γ14. Sél Th2 ogé maénkeun peran unik dina patogenesis réspon imun. Éksprési IL-4 salaku sél Th2 anu representatif tiasa nyababkeun akibat imunopatologis anu parah15.
Sanaos seueur panilitian klinis anu parantos dilakukeun kana MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, masih kurangna modél ékspériméntal sato anu cocog anu tiasa niru prosés MC anu sering kajantenan dina manusa sareng tiasa dianggo pikeun nalungtik étiologi atanapi pangobatan énggal sapertos terapi anu ditujukeun. Nepi ka ayeuna, ngan ukur sababaraha modél sato MC anu dilaporkeun nalungtik mékanisme patologis anu aya.
Dumasar kana téori otoimun anu diajukeun ku Albert sareng Ma, panilitian ieu ngadegkeun modél MC kelenci anu saderhana sareng tiasa direproduksi ku cara autotransplantasi NP caket pelat tungtung vertebral anu dibor. Tujuan sanésna nyaéta pikeun niténan karakteristik histologis modél sato sareng meunteun mékanisme spésifik NP dina kamekaran MC. Pikeun tujuan ieu, urang nganggo téknik sapertos biologi molekuler, MRI, sareng studi histologis pikeun nalungtik kamajuan MC.
Dua kelenci maot kusabab getihan nalika dioperasi, sareng opat kelenci maot nalika dibius nalika MRI. 48 kelenci sésana salamet sareng henteu nunjukkeun tanda-tanda paripolah atanapi neurologis saatos dioperasi.
MRI nunjukkeun yén inténsitas sinyal jaringan anu dipasang dina liang anu béda-béda béda-béda. Inténsitas sinyal awak vertebral L5 dina grup NPE laun-laun robih dina 12, 16 sareng 20 minggu saatos dipasang (runtuyan T1W nunjukkeun sinyal anu handap, sareng runtuyan T2W nunjukkeun sinyal campuran ditambah sinyal anu handap) (Gambar 1C), sedengkeun penampilan MRI tina dua grup bagian anu dipasang anu sanés tetep relatif stabil salami période anu sami (Gambar 1A, B).
(A) MRI sekuensial répréséntatif tina tulang tonggong lumbar kelenci dina 3 titik waktu. Teu aya abnormalitas sinyal anu kapanggih dina gambar grup operasi sham. (B) Karakteristik sinyal awak vertebral dina grup ME sami sareng anu aya dina grup operasi sham, sareng teu aya parobahan sinyal anu signifikan anu dititénan dina situs panyisipan kana waktosna. (C) Dina grup NPE, sinyal handap katingali jelas dina runtuyan T1W, sareng sinyal campuran sareng sinyal handap katingali jelas dina runtuyan T2W. Ti période 12 minggu dugi ka période 20 minggu, sinyal luhur sporadis anu ngurilingan sinyal handap dina runtuyan T2W nurun.
Hiperplasia tulang anu jelas tiasa katingali di tempat implantasi awak vertebral dina grup NPE, sareng hiperplasia tulang lumangsung langkung gancang ti 12 dugi ka 20 minggu (Gambar 2C) dibandingkeun sareng grup NPE, teu aya parobihan anu signifikan anu dititénan dina awak vertebral anu dimodelkeun; grup Sham sareng grup ME (Gambar 2C) 2A,B).
(A) Beungeut awak vertebral dina bagian anu diimplantasi lemes pisan, liangna cageur kalayan saé, sareng teu aya hiperplasia dina awak vertebral. (B) Bentuk situs anu diimplantasi dina grup ME sami sareng dina grup operasi palsu, sareng teu aya parobahan anu jelas dina penampilan situs anu diimplantasi kana waktosna. (C) Hiperplasia tulang lumangsung dina situs anu diimplantasi dina grup NPE. Hiperplasia tulang ningkat gancang sareng bahkan manjang ngaliwatan cakram intervertebral ka awak vertebral kontralateral.
Analisis histologis nyayogikeun inpormasi anu langkung lengkep ngeunaan formasi tulang. Gambar 3 nunjukkeun poto-poto bagian pasca operasi anu diwarnaan ku H&E. Dina grup operasi palsu, kondrosit disusun kalayan saé sareng teu aya proliferasi sél anu dideteksi (Gambar 3A). Kaayaan dina grup ME sami sareng dina grup operasi palsu (Gambar 3B). Nanging, dina grup NPE, sajumlah ageung kondrosit sareng proliferasi sél sapertos NP dititénan di tempat implantasi (Gambar 3C);
(A) Trabekula tiasa katingali caket pelat tungtung, kondrosit disusun rapih kalayan ukuran sareng bentuk sél anu seragam sareng teu aya proliferasi (40 kali). (B) Kaayaan tempat implantasi dina grup ME sami sareng grup palsu. Trabekula sareng kondrosit tiasa katingali, tapi teu aya proliferasi anu jelas di tempat implantasi (40 kali). (B) Katingali yén kondrosit sareng sél anu mirip NP proliferasi sacara signifikan, sareng bentuk sareng ukuran kondrosit henteu rata (40 kali).
Éksprési mRNA interleukin 4 (IL-4), mRNA interleukin 17 (IL-17), sareng mRNA interferon γ (IFN-γ) katingali dina kelompok NPE sareng ME. Nalika tingkat éksprési gén target dibandingkeun, éksprési gén IL-4, IL-17, sareng IFN-γ ningkat sacara signifikan dina kelompok NPE dibandingkeun sareng kelompok ME sareng kelompok operasi palsu (Gambar 4) (P < 0,05). Dibandingkeun sareng kelompok operasi palsu, tingkat éksprési IL-4, IL-17, sareng IFN-γ dina kelompok ME ngan ukur ningkat sakedik sareng henteu ngahontal parobahan statistik (P > 0,05).
Éksprési mRNA IL-4, IL-17 sareng IFN-γ dina grup NPE nunjukkeun tren anu langkung luhur tibatan anu aya dina grup operasi palsu sareng grup ME (P < 0,05).
Sabalikna, tingkat éksprési dina grup ME henteu nunjukkeun béda anu signifikan (P>0,05).
Analisis Western blot dilakukeun nganggo antibodi anu sayogi sacara komersil ngalawan IL-4 sareng IL-17 pikeun mastikeun pola éksprési mRNA anu robih. Sakumaha anu dipidangkeun dina Gambar 5A, B, dibandingkeun sareng grup ME sareng grup operasi palsu, tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 dina grup NPE ningkat sacara signifikan (P < 0,05). Dibandingkeun sareng grup operasi palsu, tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 dina grup ME ogé gagal ngahontal parobahan anu signifikan sacara statistik (P> 0,05).
(A) Kadar protéin IL-4 sareng IL-17 dina grup NPE sacara signifikan langkung luhur tibatan dina grup ME sareng grup plasebo (P < 0,05). (B) Histogram Western blot.
Kusabab jumlah sampel manusa anu kawates nalika operasi, panilitian anu jelas sareng lengkep ngeunaan patogenesis MC rada sesah. Kami nyobian ngadegkeun modél sato MC pikeun nalungtik mékanisme patologis poténsialna. Dina waktos anu sami, évaluasi radiologis, évaluasi histologis sareng évaluasi biologis molekuler dianggo pikeun nuturkeun jalanna MC anu diinduksi ku autograft NP. Hasilna, modél implantasi NP ngahasilkeun parobahan bertahap dina inténsitas sinyal ti titik waktos 12 minggu ka 20 minggu (sinyal rendah campuran dina runtuyan T1W sareng sinyal rendah dina runtuyan T2W), nunjukkeun parobahan jaringan, sareng évaluasi biologis histologis sareng molekuler mastikeun hasil panilitian radiologis.
Hasil tina ékspérimén ieu nunjukkeun yén parobahan visual sareng histologis lumangsung di tempat palanggaran awak vertebral dina grup NPE. Dina waktos anu sami, éksprési gén IL-4, IL-17 sareng IFN-γ, ogé IL-4, IL-17 sareng IFN-γ dititénan, nunjukkeun yén palanggaran jaringan nukleus pulposus autologus dina awak vertebral tiasa nyababkeun sarangkaian parobahan sinyal sareng morfologis. Gampang pikeun mendakan yén karakteristik sinyal awak vertebral modél sato (sinyal rendah dina runtuyan T1W, sinyal campuran sareng sinyal rendah dina runtuyan T2W) sami pisan sareng sél vertebral manusa, sareng karakteristik MRI ogé mastikeun observasi histologi sareng anatomi kasar, nyaéta, parobahan dina sél awak vertebral progresif. Sanaos réspon radang anu disababkeun ku trauma akut tiasa muncul teu lami saatos tusukan, hasil MRI nunjukkeun yén parobahan sinyal anu ningkat sacara progresif muncul 12 minggu saatos tusukan sareng teras-terasan dugi ka 20 minggu tanpa aya tanda-tanda pamulihan atanapi pambalikan parobahan MRI. Hasil ieu nunjukkeun yén NP vertebral autologus mangrupikeun metode anu tiasa dipercaya pikeun ngadegkeun MV progresif dina kelenci.
Modél tusukan ieu meryogikeun katerampilan, waktos, sareng usaha bedah anu cekap. Dina ékspérimén awal, diseksi atanapi stimulasi anu kaleuleuwihi tina struktur ligamén paravertebral tiasa nyababkeun formasi osteofit vertebral. Kudu ati-ati ulah ngaruksak atanapi ngairitasi cakram anu caket. Kusabab jerona penetrasi kedah dikontrol pikeun kéngingkeun hasil anu konsisten sareng tiasa diulang, kami sacara manual ngadamel colokan ku cara motong sarung jarum anu panjangna 3 mm. Ngagunakeun colokan ieu mastikeun jerona pangeboran anu seragam dina awak vertebral. Dina ékspérimén awal, tilu ahli bedah ortopedi anu kalibet dina operasi mendakan jarum 16-gauge langkung gampang dianggo tibatan jarum 18-gauge atanapi metode sanésna. Pikeun nyingkahan perdarahan anu kaleuleuwihi nalika ngebor, nahan jarum tetep salami sakedap bakal nyayogikeun liang sisipan anu langkung cocog, nunjukkeun yén tingkat MC anu tangtu tiasa dikontrol ku cara ieu.
Sanaos seueur panilitian anu narékahan MC, sakedik anu dipikanyaho ngeunaan étiologi sareng patogenesis MC25,26,27. Dumasar kana panilitian kami sateuacanna, kami mendakan yén autoimunitas maénkeun peran konci dina kajadian sareng kamekaran MC12. Panilitian ieu nalungtik éksprési kuantitatif IL-4, IL-17, sareng IFN-γ, anu mangrupikeun jalur diferensiasi utama sél CD4+ saatos stimulasi antigen. Dina panilitian kami, dibandingkeun sareng grup négatip, grup NPE ngagaduhan éksprési IL-4, IL-17, sareng IFN-γ anu langkung luhur, sareng tingkat protéin IL-4 sareng IL-17 ogé langkung luhur.
Sacara klinis, éksprési mRNA IL-17 ningkat dina sél NP ti pasien anu ngagaduhan herniasi diskus28. Peningkatan tingkat éksprési IL-4 sareng IFN-γ ogé kapanggih dina modél herniasi diskus non-kompresif akut dibandingkeun sareng kontrol séhat29. IL-17 maénkeun peran konci dina peradangan, tatu jaringan dina panyakit otoimun30 sareng ningkatkeun réspon imun kana IFN-γ31. Ningkatna tatu jaringan anu dimediasi IL-17 parantos dilaporkeun dina beurit MRL/lpr32 sareng beurit anu rentan ka otoimunitas33. IL-4 tiasa ngahambat éksprési sitokin proinflamasi (sapertos IL-1β sareng TNFα) sareng aktivasi makrofag34. Dilaporkeun yén éksprési mRNA IL-4 béda dina grup NPE dibandingkeun sareng IL-17 sareng IFN-γ dina waktos anu sami; Éksprési mRNA IFN-γ dina grup NPE sacara signifikan langkung luhur tibatan dina grup anu sanés. Ku alatan éta, produksi IFN-γ tiasa janten mediator réspon peradangan anu diinduksi ku interkalasi NP. Panilitian nunjukkeun yén IFN-γ dihasilkeun ku sababaraha jinis sél, kalebet sél T helper tipe 1 anu diaktipkeun, sél natural killer, sareng makrofag35,36, sareng mangrupikeun sitokin pro-radang konci anu ningkatkeun réspon imun37.
Panilitian ieu nunjukkeun yén réspon otoimun tiasa kalibet dina kajadian sareng kamekaran MC. Luoma et al. mendakan yén karakteristik sinyal MC sareng NP anu nonjol sami dina MRI, sareng duanana nunjukkeun sinyal anu luhur dina runtuyan T2W38. Sababaraha sitokin parantos dikonfirmasi aya hubunganana raket sareng kajadian MC, sapertos IL-139. Ma et al. nunjukkeun yén tonjolan NP ka luhur atanapi ka handap tiasa gaduh pangaruh anu ageung kana kajadian sareng kamekaran MC12. Bobechko40 sareng Herzbein et al.41 ngalaporkeun yén NP mangrupikeun jaringan imunotoleran anu henteu tiasa lebet kana sirkulasi vaskular ti saprak lahir. Tonjolan NP ngenalkeun benda asing kana suplai getih, sahingga ngamediasi réaksi otoimun lokal42. Réaksi otoimun tiasa nimbulkeun sajumlah ageung faktor imun, sareng nalika faktor-faktor ieu terus-terusan kakeunaan jaringan, éta tiasa nyababkeun parobahan dina sinyal43. Dina panilitian ieu, overéksprési IL-4, IL-17 sareng IFN-γ mangrupikeun faktor imun anu khas, langkung ngabuktikeun hubungan anu raket antara NP sareng MCs44. Modél sato ieu nirukeun kamajuan NP sareng asupna kana pelat tungtung kalayan saé. Prosés ieu langkung ngungkabkeun dampak autoimunitas kana MC.
Sapertos anu dipiharep, modél sato ieu nyayogikeun platform anu mungkin pikeun nalungtik MC. Nanging, modél ieu masih ngagaduhan sababaraha watesan: anu kahiji, salami fase observasi sato, sababaraha kelenci tahap panengah kedah dieutanasia pikeun uji biologi histologis sareng molekuler, janten sababaraha sato "teu dianggo deui" kana waktosna. Kadua, sanaos tilu titik waktos ditetepkeun dina panilitian ieu, hanjakalna, urang ngan ukur modél hiji jinis MC (parobahan tipe Modic I), janten éta henteu cekap pikeun ngagambarkeun prosés perkembangan panyakit manusa, sareng langkung seueur titik waktos kedah ditetepkeun pikeun niténan sadaya parobihan sinyal. Katilu, parobihan dina struktur jaringan memang tiasa dipidangkeun sacara jelas ku pewarnaan histologis, tapi sababaraha téknik khusus tiasa ngungkabkeun parobihan mikrostruktural dina modél ieu. Salaku conto, mikroskop cahaya terpolarisasi dianggo pikeun nganalisis formasi fibrokartilago dina cakram intervertebral kelenci45. Pangaruh jangka panjang NP dina MC sareng endplate meryogikeun panilitian salajengna.
Lima puluh opat kelenci bodas Selandia Baru jalu (beuratna sakitar 2,5-3 kg, umur 3-3,5 bulan) dibagi sacara acak kana kelompok operasi palsu, kelompok implantasi otot (kelompok ME) sareng kelompok implantasi akar saraf (kelompok NPE). Sadaya prosedur ékspériméntal disatujuan ku Komite Étika Rumah Sakit Tianjin, sareng metode ékspériméntal dilaksanakeun saluyu sareng pedoman anu disatujuan.
Sababaraha pamutahiran parantos dilakukeun kana téknik bedah S. Sobajima 46. Unggal kelenci ditempatkeun dina posisi recumbency lateral sareng permukaan anterior tina lima cakram intervertebral lumbar (IVD) anu padeukeut diekspos nganggo pendekatan retroperitoneal posterolateral. Unggal kelenci dibéré anestesi umum (20% uretan, 5 ml/kg ngalangkungan véna ceuli). Sayatan kulit longitudinal dilakukeun ti ujung handap iga dugi ka pinggiran pelvis, 2 cm ventral dugi ka otot paravertebral. Tulang tonggong anterolateral katuhu ti L1 dugi ka L6 diekspos ku dibedah seukeut sareng tumpul tina jaringan subkutaneus, jaringan retroperitoneal, sareng otot anu aya di luhurna (Gambar 6A). Tingkat cakram ditangtukeun nganggo pinggiran pelvis salaku landmark anatomis pikeun tingkat cakram L5-L6. Anggo jarum tusukan 16-gauge pikeun ngebor liang caket pelat tungtung vertebra L5 dugi ka jerona 3 mm (Gambar 6B). Anggo jarum suntik 5 ml pikeun nyedot nucleus pulposus autologus dina cakram intervertebral L1-L2 (Gambar 6C). Cabut nucleus pulposus atanapi otot numutkeun sarat unggal grup. Saatos liang bor dijerokeun, jahitan anu tiasa diserep dipasang dina fasia jero, fasia superfisial sareng kulit, ati-ati supados henteu ngaruksak jaringan periosteal awak vertebral nalika operasi.
(A) Disk L5–L6 diekspos ngaliwatan pendekatan retroperitoneal posterolateral. (B) Anggo jarum 16-gauge pikeun ngebor liang caket pelat tungtung L5. (C) MF autologus dipanén.
Anestesi umum dibikeun nganggo uretan 20% (5 ml/kg) anu dibikeun ngalangkungan véna ceuli, sareng radiografi tulang tonggong lumbar diulang dina 12, 16, sareng 20 minggu pasca operasi.
Kelenci dikorbankeun ku cara nyuntik ketamin (25,0 mg/kg) sacara intramuskular sareng natrium pentobarbital (1,2 g/kg) sacara intravena dina 12, 16, sareng 20 minggu saatos operasi. Sakabéh tulang tonggong dipiceun pikeun analisis histologis sareng analisis nyata dilaksanakeun. Transkripsi tibalik kuantitatif (RT-qPCR) sareng Western blotting dianggo pikeun ngadeteksi parobahan dina faktor imun.
Pamariksaan MRI dilakukeun dina kelenci nganggo magnet klinis 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) anu dilengkepan ku panarima koil tungkai ortogonal. Kelenci dibius ku 20% uretan (5 mL/kg) ngalangkungan urat ceuli teras disimpen telentang dina magnet kalayan daérah lumbar dipusatkeun dina koil permukaan sirkular diaméter 5 inci (GE Medical Systems). Gambar lokalizer beurat koronal T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) dicandak pikeun nangtukeun lokasi cakram lumbar ti L3–L4 dugi ka L5–L6. Irisan beurat pesawat sagital T2 dicandak kalayan setélan ieu: runtuyan gema spin gancang kalayan waktos pangulangan (TR) 2200 ms sareng waktos gema (TE) 70 ms, matriks; widang visual 260 sareng dalapan rangsangan; Ketebalan motong nyaéta 2 mm, celahna nyaéta 0,2 mm.
Saatos poto terakhir dicandak sareng kelenci terakhir dipeuncit, cakram sham, muscle-embedded, sareng NP dipiceun pikeun pamariksaan histologis. Jaringan difiksasi dina formalin buffer nétral 10% salami 1 minggu, didekalsifikasi ku asam etilendiamintetraasetat, sareng parafin dipotong. Blok jaringan dilebetkeun kana parafin sareng dipotong janten bagian sagital (kandelna 5 μm) nganggo mikrotom. Bagian-bagian diwarnaan ku hematoxylin sareng eosin (H&E).
Saatos ngumpulkeun cakram intervertebral tina kelenci dina unggal kelompok, total RNA diekstrak nganggo kolom UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Cina) numutkeun pitunjuk produsén sareng sistem transkripsi tibalik ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, USA). Transkripsi tibalik dilaksanakeun.
RT-qPCR dilaksanakeun nganggo Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) sareng SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) numutkeun parentah produsén. Volume réaksi PCR nyaéta 20 μl sareng ngandung 1,5 μl cDNA anu diéncérkeun sareng 0,2 μM tina unggal primer. Primer dirancang ku OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) sareng diproduksi ku Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Cina) (Tabel 1). Kaayaan siklus termal ieu dianggo: léngkah aktivasi polimérase awal dina 94°C salami 2 menit, teras 40 siklus 15 detik masing-masing dina 94°C pikeun denaturasi citakan, annealing salami 1 menit dina 60°C, éksténsi, sareng fluoresensi. Pangukuran dilaksanakeun salami 1 menit dina 72°C. Sadaya sampel diamplifikasi tilu kali sareng nilai rata-rata dianggo pikeun analisis RT-qPCR. Data amplifikasi dianalisis nganggo FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Éksprési gén IL-4, IL-17, sareng IFN-γ dinormalisasi kana kontrol éndogén (ACTB). Tingkat éksprési relatif mRNA target diitung nganggo metode 2-ΔΔCT.
Total protéin diekstrak tina jaringan nganggo homogenizer jaringan dina buffer lisis RIPA (ngandung koktail inhibitor protease sareng fosfatase) teras disentrifugasi dina 13.000 rpm salami 20 menit dina suhu 4°C pikeun miceun runtah jaringan. Lima puluh mikrogram protéin dimuat per jalur, dipisahkeun ku 10% SDS-PAGE, teras dipindahkeun ka mémbran PVDF. Blokir dilakukeun dina susu garing tanpa lemak 5% dina larutan saline buffer Tris (TBS) anu ngandung 0,1% Tween 20 salami 1 jam dina suhu kamar. Mémbran diinkubasi ku antibodi primér anti-decorin kelenci (diéncérkeun 1:200; Boster, Wuhan, Cina) (diéncérkeun 1:200; Bioss, Beijing, Cina) sapeuting dina suhu 4°C sareng diréaksikeun dina dinten kadua; kalayan antibodi sekundér (imunoglobulin G anti-kelinci embe dina éncér 1:40.000) digabungkeun sareng peroksidase horseradish (Boster, Wuhan, Cina) salami 1 jam dina suhu kamar. Sinyal Western blot dideteksi ku paningkatan kemiluminesensi dina mémbran kemiluminesensi saatos iradiasi sinar-X. Pikeun analisis densitometrik, blot di-scan sareng diukur nganggo parangkat lunak BandScan sareng hasilna dikedalkeun salaku babandingan imunoreaktivitas gén target sareng imunoreaktivitas tubulin.
Itungan statistik dilakukeun nganggo pakét parangkat lunak SPSS16.0 (SPSS, USA). Data anu dikumpulkeun salami panilitian dinyatakeun salaku rata-rata ± simpangan baku (rata-rata ± SD) sareng dianalisis nganggo analisis varian ukuran berulang hiji arah (ANOVA) pikeun nangtukeun bédana antara dua kelompok. P < 0,05 dianggap signifikan sacara statistik.
Ku kituna, ngadegkeun modél sato MC ku cara ngasupkeun NP autolog kana awak vertebral sareng ngalakukeun observasi makroanatomis, analisis MRI, evaluasi histologis sareng analisis biologis molekuler tiasa janten alat anu penting pikeun meunteun sareng ngartos mékanisme MC manusa sareng ngembangkeun intervensi terapi énggal.
Kumaha nyutat artikel ieu: Han, C. et al. Modél sato tina parobahan Modic diadegkeun ku cara implantasi nukleus pulposus autologus kana tulang subkondral tulang tonggong lumbar. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., sareng Boos, N. Pencitraan résonansi magnét tulang tonggong lumbar: Prévalénsi herniasi sareng rétensi cakram, komprési akar saraf, abnormalitas pelat tungtung, sareng osteoarthritis sendi faset dina sukarelawan asimtomatik. laju. Radiologi 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, sareng Leboeuf-Eed, K. Parobahan Modic sareng hubunganana sareng panemuan klinis. European Spine Journal: publikasi resmi European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity, sareng the European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Parobahan modis dina pelat tungtung vertebra lumbar: Prévalénsi sareng hubunganana sareng nyeri tonggong handap sareng sciatica dina pagawé lalaki paruh baya. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., sareng Dalinka, M. MRI parobahan sumsum tulang caket pelat tungtung dina panyakit degeneratif tulang tonggong lumbar. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, sareng Carter, JR Panyakit cakram degeneratif: évaluasi parobahan sumsum tulang tonggong nganggo MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, sareng Carter, JR Pencitraan panyakit cakram degeneratif. Radiologi 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologi.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prédiktor tina neovertebral endplate (Modic) nunjukkeun parobahan dina populasi umum. European Spine Journal: Publikasi Resmi European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity, and the European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB sareng Mannisch, K. Parobahan Modic saatos herniasi cakram lumbar. Jurnal Tulang Tonggong Éropa: Publikasi Resmi Masyarakat Tulang Tonggong Éropa, Masyarakat Deformitas Tulang Tonggong Éropa sareng Masyarakat Éropa pikeun Panalungtikan Tulang Tonggong Serviks 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., sareng Kaapa, E. Parobahan tipe I modic tiasa ngaduga degenerasi cakram deformasi anu gancang progresif: panilitian prospektif 1 taun. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ sareng Fan, SW Parobahan modic: kamungkinan sabab sareng kontribusi kana degenerasi cakram lumbar. Hipotesis Médis 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Pecahna cakram internal. Masalah prolaps cakram salami 50 taun. Tulang tonggong (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Waktos posting: 13 Désémber 2024